В диагностике инфекционных заболеваний используются различные лабораторные методы обнаружения возбудителей. Одним из наиболее прогрессивных, специфичных и точных лабораторных тестов является анализ методом ПЦР, позволяющий определять наличие возбудителей в крови и других видах биологического материала, обнаруживать микроорганизмы на первых стадиях развития болезни, в случаях носительства инфекции.
Анализ на ПЦР на специальной аппаратуре
Как проводят диагностические тесты с помощью ПЦР
Полимеразная цепная реакция – лабораторный молекулярно-биологический способ обнаружения ДНК бактерий и грибов, ДНК и РНК вирусов. Основа ПЦР – особая ферментативная реакция, протекающая в присутствии специальных ферментов и веществ молекулярной природы. Благодаря тому, что метод способен зафиксировать наличие непосредственно возбудителя болезни, его считают наиболее информативным и чувствительным при выявлении латентных инфекций и носительства по сравнению со всеми другими диагностическими методами.
Анализ биологических образцов с помощью ПЦР-тестирования позволяет быстро обнаружить присутствие самих бактерий и вирусов.
Остальные лабораторные способы диагностики, как правило, определяют косвенные признаки инфекции, либо требуют длительной процедуры проверки.
Основными стадиями ПЦР-методики являются:
- взятие биологического материала, его доставка в диагностическую лабораторию,
- выделение генетического материала бактерий и вирусов из взятого материала,
- непосредственно анализ ПЦР и расшифровка полученных данных.
Для постановки реакции ПЦР используют образцы жидкостей, тканей, секретов, в которых предполагают присутствие болезнетворных микроорганизмов. Чаще всего в качестве образцов для тестирования используют венозную кровь, плазму или сыворотку крови. В лаборатории бактериальные и вирусные частицы отделяют от остальных компонентов и с использованием специальных реагентов выделяют из них молекулы ДНК или РНК.
Полимеразная цепная реакция
На следующей стадии эти генетические молекулы многократно размножают в специальных приборах. Для этого используют особые ферменты и молекулы, которые позволяют искусственно размножить строго определенный вид ДНК, принадлежащий только одному конкретному возбудителю. В результате реакции образуется огромное количество коротких фрагментов ДНК, идентичных тем, что входят в состав вирусов и бактерий.
Читайте также: Повышение эозинофилов в крови — причины и лечение
На третьем этапе накопленные фрагменты обнаруживают с помощью специальных красителей и оборудования для детекции. Если в исходном образце содержались болезнетворные микроорганизмы, в результате реакции образуется специфический продукт, и анализ показывает положительный результат. Если возбудителя в материале не было, продукт реакции не синтезируется и тест дает отрицательный результат.
Тестирование методом ПЦР – один из самых быстрых способов диагностики инфекций. Полный цикл проверки материала занимает от нескольких часов до одного дня.
Именно использование в реакции многократного размножения молекул ДНК строго определенного вида позволяет точно определять наличие микроорганизмов в биологических образцах с предельной чувствительностью. Даже незначительная концентрация инфекционных агентов в тканях и жидкостях организма может привести к синтезу огромного количества продукта реакции и положительному заключению.
Какие инфекции определяют ПЦР-тестом
С помощью технологии ПЦР детектируют присутствие самых разных бактерий, дрожжеподобных клеток, вирусных частиц. В современной диагностической практике анализ ПЦР наиболее распространен для выявления возбудителей следующих заболеваний:
- ВИЧ-инфекция (СПИД),
- гепатиты (гепатит B, гепатит С и другие более редкие разновидности),
- цитомегаловирусная инфекция,
- практически все инфекционные заболевания мочеполового тракта,
- кандидоз,
- микоплазмоз,
- инфекции, вызванные герпес-вирусами,
- папилломовирусная инфекция,
- токсоплазмоз,
- кишечные заболевания,
- дифтерия,
- туберкулез,
- редкие очаговые инфекции,
- мононуклеоз и многие другие.
Полимеразная цепная реакция – самый распространенный, достоверный и быстрый метод обнаружения половых инфекций, гепатита, ВИЧ, папиллом и других заболеваний.
Для многих диагностируемых заболеваний ПЦР не является единственным способом диагностики. Диагноз подтверждается врачом только при наблюдении других признаков болезни.
Схема выявления вирусов и бактерий
Но для целого ряда случаев полимеразная реакция является «золотым стандартом» лабораторной диагностики.
Список обнаруживаемых с помощью ПЦР инфекций расширяется с каждым годом. Развитие метода уже позволило определять одновременно несколько возбудителей. Это послужило распространению комплексных программ обследований. Среди них: комплексное исследование микрофлоры на бактериальный вагиноз, определение TORCH-инфекций, выявление папиллом человека высокого и низкого канцерогенного риска. Кроме того, анализ крови ПЦР входит в обязательный госпитальный комплекс диагностики.
Читайте также: Причины повышения показателя АСТ в анализе крови
С использованием полимеразной реакции ученые смогли определить молекулы, сигнализирующие о развитии разных форм злокачественных опухолей — онкомаркеры. Благодаря чему метод нашел применение в раннем выявлении рака. ПЦР-тесты активно используют для обнаружения наследственных генетических дефектов, в том числе в пренатальной диагностике и в процессе планирования беременности.
Особенности биологического материала для анализа ПЦР
Забор определенного вида материала для исследования определяется типом инфекции, которую хотят диагностировать в результате тестирования. В качестве исследуемых образцов выполняют забор:
- венозной крови,
- слюны,
- соскобов, например из цервикального канала, с внутренней стороны щеки,
- образцов слизи,
- мочи,
- плевральной жидкости,
- образцов спермы и секрета предстательной железы,
- мокроты и бронхо-легочного лаважа,
- выделений из уретры.
Результаты могут расшифровать только специалисты
В случае отдельных инфекций и при особых показаниях врачи могут назначить анализ спинномозговой жидкости. В обнаружении внутриутробных заболеваний применяют образцы плаценты и околоплодных вод.
В общем случае для диагностики с помощью ПЦР используют тот вид материала, в котором с большой вероятностью присутствует непосредственно сам возбудитель заболевания. Вид биологического материала определяется врачом при направлении на анализ.
Чтобы анализ был точным и правильным необходима простая подготовка перед забором материала и соблюдение особой чистоты взятия образов и проведения самого анализа.
Для получения точного результата анализа следует придерживаться нескольких правил подготовки и забора материала на исследование:
- отменить половые контакты за несколько дней до забора материала из половых органов и в случае диагностики половых инфекций по анализу крови,
- венозную кровь на ПЦР анализ сдавать утром, перед сдачей не употреблять напитки и еду,
- не курить минимум за два часа до сдачи крови,
- мочу собирать строго в стерильный контейнер сразу после сна.
Важно! Прием антибиотиков и других лекарственных препаратов может исказить результаты анализа. Перед сдачей материала следует проконсультироваться с врачом.
Если для выполнения анализа ПЦР планируется забор материала из половых органов, рекомендуется отменить использование антибактериальных гигиенических средств и сильнодействующих лекарственных препаратов по согласованию с лечащим врачом.
Читайте также: Что такое анализ крови на HBs
Как расшифровать результат анализа ПЦР
Результаты ПЦР-анализа обычно представлены в качественном формате. Инфекционный агент либо обнаруживается в образце биологического материала, либо не детектируется в нем.
Интерпретация заключения в этом случае максимально проста:
- положительный результат свидетельствует о том, что микроорганизм присутствовал в анализируемом образце,
- отрицательный тест указывает на то, что инфекционный агент не был обнаружен.
Внимание! Отрицательный результат иногда является следствием неправильного забора материала или ошибок в процессе проведения анализа.
При наличии явных симптомов заболевания и подозрении на ложноотрицательный результат может быть целесообразно повторить исследование.
Проведение анализа ПЦР требует большой точности
В особых случаях используют количественные методы определения возбудителя. Результаты таких анализов выдаются в виде полученной концентрации ДНК или РНК возбудителя в пересчете на определенный объем материала. Например, в копиях молекул ДНК на миллилитр плазмы крови.
Количественный и полуколичественный анализ ПЦР и расшифровка его результатов выполняются для мониторинга течения заболевания, определения вирусной нагрузки, выявления стадии болезни, диагностики заболеваний, вызванных условными патогенами.
Положительные стороны диагностики методом ПЦР
Активное внедрение метода полимеразной цепной реакции в диагностику такого широкого спектра инфекционных болезней стало возможным благодаря целому ряду его преимуществ:
- высокая специфичность метода – анализ позволяет обнаруживать строго определенный вид ДНК возбудителей,
- возможность постановки анализа на поток и автоматизации процесса,
- высокая чувствительность метода и возможность диагностировать болезнь на ранних стадиях,
- диагностика одновременно нескольких инфекций;
- быстрота процедуры и небольшая стоимость расходных материалов.
К недостаткам метода можно отнести необходимость дорогостоящего оборудования, высокие требования к чистоте и технологичности лаборатории, возможность получения ложных результатов при несоблюдении методики анализа.
Похожие статьи
Помогла статья? Оцените её
Загрузка…